发布者：pcrarray专业PCR芯片网 时间：2020-09-23 浏览量：1250
WCGENE mRNA cDNA kit
mRNA cDNA合成试剂盒
货号：WC-SJH0001
产品内容
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编号 |
产品组成 |
10μl × 10次 |
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1 |
5 × RT Mix |
20 μl |
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2 |
无RNA酶ddH2O |
100 μl ×1 |
运输条件：冰袋运输。
储存条件：-20℃。
样品质量要求（建议）：RNA无降解，A260/A280比值应为1.8-2.0；浓度50 ng /μl以上
产品说明
1． 制品为预先混好的 Premix 形式，只需加入模板 RNA 和水便可以开始反应。
2． 可以在较短时间内高效合成实验所需cDNA，适合进行进行两步法反应。
3． 反转录引物包含随机引物和Oligo dT 2 种，可以合成适合 Real Time PCR 用 cDNA。
使用注意
1. 5 × RT Mix 使用前离心收集到反应管底部，用移液枪慢慢反复吸打充分混匀后使用。
2. 使用的枪头务必保证无污染。
3. 本制品中已经加入了Oligo dT 和随机引物，如果要使用特异引物进行反转录反应，则不能使用本制品。
4. 操作步骤
一、反转录体系的配制
按照下表配制RT反应液总体系10 μl，配置时请在冰上操作。
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试剂 |
10 μl体系 |
终浓度 |
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5 × RT Mix |
2 μl |
1 × |
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单个样品总RNA |
- |
RNA总量500ng |
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无RNA酶ddH2O |
补至10 μl |
- |
* 反应体系可按需求相应放大。
二、反转录程序
移液器轻轻混匀上述配制的反应液，按下表程序进行逆转录反应：
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反应温度 |
反应时间 |
说明 |
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37℃ |
15 min |
逆转录反应 |
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85℃ |
5 sec |
酶失活反应 |
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4℃ |
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注意：得到的 RT 反应液加入到下一步的 Real Time PCR 反应体系中，其加入量不要超过 Real Time PCR 反应体积的 1/10（V/V）量。
三、Real Time PCR
使用本制品合成cDNA后，进行 Real Time PCR ，按照仪器使用说明书进行操作。
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参考文献
Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.
Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,
Xu X, Tao Y, Niu Y, et al. miR-125a-5p inhibits tumorigenesis in hepatocellular carcinoma. Aging (Albany NY). 2019;11(18):7639–7662. doi:10.18632/aging.102276